近年來，科學(xué)家們對血管生成特別是腫瘤血管生成的投入較大，并且腫瘤血管生成是一個極其復(fù)雜的過程，一般包括血管內(nèi)皮基質(zhì)降解、內(nèi)皮細胞移行、內(nèi)皮細胞增殖、內(nèi)皮細胞管道化分支形成血管環(huán)和形成新的基底膜等步驟。由于腫瘤組織這種新生血管結(jié)構(gòu)及功能異常，且血管基質(zhì)不完善，這種微血管容易發(fā)生滲漏，因此腫瘤細胞不需經(jīng)過復(fù)雜的侵襲過程而直接穿透到血管內(nèi)進入血流并在遠隔部位形成轉(zhuǎn)移。越來越多的研究表明，良性腫瘤血管生成稀少，血管生長緩慢；而大多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長迅速。因此，血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用，抑制這一過程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴散轉(zhuǎn)移。

血管生成（Angiogenesis）主要包括兩種方式，即出芽式血管生成（sprouting angiogenesis）和分裂式血管生成（splitting angiogenesis）。出芽式血管生成過程主要包括毛細血管基底膜的酶降解，減弱內(nèi)皮細胞 （endothelial cells，ECs）間連接，ECs向著血管生成刺激因子引導(dǎo)方向增殖、出芽并發(fā)出細長的絲狀偽足（filopodia）。絲狀偽足分泌蛋白水解酶，切割細胞外基質(zhì)，為血管出芽開辟道路。隨后血管發(fā)生融合和修剪并伴隨周細胞逐漸穩(wěn)定。分裂式血管生成是指現(xiàn)有的血管僅通過細胞重組分裂成為兩個血管，其不依賴于細胞增殖或遷移，相較于出芽式血管生成。分裂式血管生成是一種快速的血管生成方式，通常發(fā)生在血管生成的早期。血管生成在胚胎發(fā)育和心血管成熟過程中發(fā)揮重要作用，其正常發(fā)生高度依賴于血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能的完整性。

通過血管生成形成新的血液和淋巴管對發(fā)育至關(guān)重要，對組織再生和腫瘤發(fā)生至關(guān)重要。血管管腔側(cè)被組織良好的內(nèi)皮細胞層覆蓋。血管生成是由內(nèi)皮細胞增殖和遷移驅(qū)動的，在此過程中，內(nèi)皮細胞通過重塑與血管微環(huán)境的相互作用和內(nèi)皮細胞之間的接觸來集體協(xié)調(diào)運動。

       研究表明，內(nèi)皮細胞YAP/TAZ復(fù)合體對新生血管生成和維持血管內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。然而，對于YAP/TAZ復(fù)合體如何調(diào)控脈管系統(tǒng)的潛在分子機制仍不清楚。近期，由荷蘭阿姆斯特丹心血管科學(xué)中心研究人員發(fā)現(xiàn)，DLC1(detected-in-liver-cancer)是激活YAP/TAZ 復(fù)合體的直接轉(zhuǎn)錄靶點。DLC1的表達對于整合素介導(dǎo)的黏著破壞、細胞極化、細胞集群遷移和新生血管的觸發(fā)及促進都是必要的。并進一步證明了在內(nèi)皮細胞中DLC1的異位表達增強了它們的遷移和新生血管出芽能力。綜上所述，研究證明了DLC1是YAP/TAZ在內(nèi)皮細胞中的一個重要轉(zhuǎn)錄靶點，表明DLC1在YAP/TAZ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，并可能對由YAP/TAZ驅(qū)動的血流感知和相關(guān)血管疾病的研究具有更廣泛的指導(dǎo)意義。

基于EVOS M7000智能活細胞成像系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測DLC1調(diào)控出芽式血管生成研究。

圖1，經(jīng)shControl或shDLC1慢速轉(zhuǎn)導(dǎo)的HUVECs經(jīng)VEGF刺激后16小時，選取具有代表性的橢球狀生長圖像。基于中位數(shù)統(tǒng)計了累積發(fā)芽長度和基于球狀發(fā)芽血管生成試驗的發(fā)芽數(shù)量。數(shù)據(jù)來自三個獨立的實驗shControl(63個球體)，shDLC1(47個球體)，p<0.001。

圖2，經(jīng)GFP或GFP - dlc1慢速轉(zhuǎn)導(dǎo)的HUVECs經(jīng)VEGF刺激后16小時，選取具有代表性的橢球狀生長圖像。基于中位數(shù)統(tǒng)計了累積發(fā)芽長度和基于球狀發(fā)芽血管生成試驗的發(fā)芽數(shù)量。數(shù)據(jù)來自三個獨立的實驗;GFP(25個細胞球)，GFP - dlc1(27個細胞球)，p<0.001。

圖3，用shControl或shDLC1 3'UTR-HUVECs，用GFP或GFP- dlc1 HUVECs在VEGF刺激后16小時出現(xiàn)了具有代表性的細胞球形芽。基于中位數(shù)累積統(tǒng)計了芽長和每個球體芽數(shù)。數(shù)據(jù)來自三個獨立的實驗，shControl(33個細胞球)，shDLC1 3'UTR(29個細胞球)，rescue GFP(39個細胞球)，rescue GFP- dlc1(37個細胞球)。p<0.001。在A-C中，黃色區(qū)域量化分析出芽數(shù)據(jù)。

基于EVOS M7000智能活細胞成像系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測DLC1挽救了yap缺失的內(nèi)皮細胞的遷移和發(fā)芽缺陷。

圖4，用shControl或shYAP轉(zhuǎn)導(dǎo)，并用GFP或GFP - dlc1誘導(dǎo)的HUVECs的對比圖像，在劃痕試驗中(劃傷后取t=0, t=4, t=8和t=12小時數(shù)據(jù))。黃線顯示未閉合的傷口區(qū)域。

圖5，VEGF刺激16小時后，選取有代表性的細胞球圖像（shControl、shYAP轉(zhuǎn)導(dǎo)HUVECs，用GFP或GFP -修復(fù)HUVECs DLC1）。用黃色顯示了出芽量化分析。基于中位數(shù)統(tǒng)計分析了累積芽長和每個細胞球出芽數(shù)。數(shù)據(jù)來自三個獨立的實驗;shControl(27個細胞球)，shYAP(18個細胞球)，rescue GFP(21個細胞球)，rescue GFP- dlc1(28個細胞球)。p<0.001

       研究結(jié)論顯示，以YAP/TAZ復(fù)合體或其下游靶點如DLC1作為靶點，有望成為血管相關(guān)硬化類疾病的治療方法。最近的一項研究也進一步表明，DLC1缺失是一個上游內(nèi)皮細胞惡性腫瘤中YAP/TAZ信號的誘導(dǎo)因子。這也符合YAP/TAZ和DLC1通過在局部粘連處相互調(diào)控的反饋機制。因為DLC1在內(nèi)皮細胞以外的許多細胞類型中均有表達，而且由于DLC1已被鑒定為各種類型癌癥的抑癌因子。并預(yù)測DLC1可能在YAP/TAZ驅(qū)動的癌細胞行為或其他涉及粘連蛋白重建的上皮組織過程中發(fā)揮重要作用。